特色方案｜19 種氨基酸分析（AQC 柱前衍生法）
發布時間:
2025-12-01
19 種氨基酸分析（AQC 柱前衍生法）
摘要 ：本文建立了19種氨基酸AQC柱前衍生的 HPLC 分析方法。參照《中國藥典》四部中的色譜條件并進行優化，采用色譜柱 Shim-pack Scepter C18-120分析經AQC衍生后的 19 種氨基酸，結果顯示，目標物峰型對稱，分離度均大于1.5，且重復性良好， 滿足標準要求。此方法可為 19 種蛋白氨基酸的檢測提供參考。
關鍵詞：氨基酸/ AQC 衍生/ Shim-pack Scepter C18-120 /HPLC
01.實驗部分
1.1 實驗儀器及耗材
Shimadzu LC-20AD 高效液相色譜儀；
色譜柱：Shim-pack Scepter C18-120（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06） ；
純水機：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L 水箱 + 取水器） ；
SHIMSEN Disc HPPTFE 針式過濾器（P/N：380-00341） ；
LC/MS 認證樣品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
Nichipet Air 移液槍：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；
Nichipet Air 10-100 μL（ P/N：00-NAR-100） ；
Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000） ；
Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）
1.2 混合對照品溶液的配制
分別精密稱取 19 種氨基酸和γ-氨基丁酸（內標）適量，加水或鹽酸水溶液（天冬氨酸、胱氨酸、酪氨酸）溶解并稀釋至 1 mg/mL，得到各單標母液；分別精密吸取各單標母液 100μL 于 1.5mL 離心管中，精密加入 700μL 硼酸鹽溶液（ 0.4mol/L：取硼酸 12.36g，加水 400 mL 溶解，用 40%氫氧化鈉溶液調 pH 至 8.8，加水稀釋至 500mL）和 200μL 的 AQC 溶液（稱取 AQC 適量，加乙腈適量，55°C 加熱 10min，并超聲使溶解后用乙腈稀釋至 1.6mg/mL），渦旋混勻，蓋蓋密封，55°C 加熱 10min，放冷，得到衍生后的各單標溶液；分別各取衍生的單標溶液 50μL，混勻，備用。（ 注意：半胱氨酸易降解，需要現用現配現衍生）
1.3 分析條件
色譜柱：Shim-pack Scepter C18-120（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06）
柱溫：40℃
檢測波長：248 nm
流速：1.5 mL/min
進樣量：5 μL
自動進樣器溫度：4℃
流動相：A：醋酸鹽水溶液（取醋酸銨 10.8g，加水 900 mL 溶解，用磷酸調 pH 至 5.0，加水至 1000 mL）
B：乙腈-水（60：40）
梯度程序如下：
02.實驗結果
按照上述色譜條件（1.3）進行采集，混合對照品溶液色譜圖如下：
1.混合對照品溶液
2.重復性
混合對照品溶液重復性
03.結論
本文建立了 19 種氨基酸 AQC 柱前衍生的 HPLC 分析方法。參照 《中國藥典》四部中的色譜條件并進行優化，采用色譜柱 Shim-pack Scepter C18-120 分析經 AQC 衍生后的 19 種氨基酸，結果顯示，目標物峰型對稱， 分離度均大于 1.5，且重復性良好，滿足標準要求。此方法可為 19 種蛋白氨基酸的檢測提供參考。
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